????劉伯華等利用分離的SAＲS－CoV毒株BJ－01，經(jīng)滴鼻等途徑感染大鼠、豚鼠、黑線倉(cāng)鼠、白化倉(cāng)鼠和雛雞等5個(gè)種屬的動(dòng)物，篩選對(duì)SAＲS易感的小動(dòng)物來(lái)建立SAＲS的理想動(dòng)物模型。鄧巍等用BALB/c小鼠和雪貂感染H7N9禽流感病毒后，研究肺組織動(dòng)態(tài)病理學(xué)變化。

????動(dòng)物生物安全實(shí)驗(yàn)室是指對(duì)用病原微生物進(jìn)行生物感染實(shí)驗(yàn)研究時(shí)所產(chǎn)生的生物危害具有物理防護(hù)能力的生物安全實(shí)驗(yàn)室。

????根據(jù)生物安全實(shí)驗(yàn)室防護(hù)水平分為四級(jí)，以ABSL－1、ABSL－2、ABSL－3、ABSL－4表示涉及從事感染動(dòng)物活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室的相應(yīng)生物安全防護(hù)水平。其中ABSL－3、ABSL－4實(shí)驗(yàn)室適用于具有氣溶膠傳播潛在危害和引起致命性疾病的微生物感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究工作。由于其操作的微生物能夠引起人類或者動(dòng)物非常嚴(yán)重的疾病，較容易直接或者間接在人與人、人與動(dòng)物、動(dòng)物與動(dòng)物間傳播，因而生物安全防護(hù)水平最高。

????高級(jí)別動(dòng)物生物安全實(shí)驗(yàn)室建設(shè)過(guò)程中，氣密性保證實(shí)驗(yàn)室空氣潔凈度、室內(nèi)實(shí)驗(yàn)人員和室外環(huán)境安全的重要手段。本文結(jié)合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)要求，對(duì)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)過(guò)程中氣密性的實(shí)現(xiàn)以及檢測(cè)進(jìn)行探討，以期為我國(guó)高級(jí)別動(dòng)物生物安全實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)提供參考。

1 氣密性要求

????實(shí)驗(yàn)室氣密性要求是對(duì)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)區(qū)的氣密性要求。實(shí)驗(yàn)室的防護(hù)區(qū)是實(shí)驗(yàn)室區(qū)域內(nèi)，生物風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較大，需對(duì)實(shí)驗(yàn)室的平面設(shè)計(jì)、圍護(hù)結(jié)構(gòu)的密閉性、氣流以及人員進(jìn)入、個(gè)體防護(hù)等進(jìn)行控制的區(qū)域（表1）。不同級(jí)別實(shí)驗(yàn)室對(duì)防護(hù)區(qū)的劃分不同。

????為保證實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境安全，應(yīng)保證生物安全實(shí)驗(yàn)室防護(hù)區(qū)始終處于相對(duì)密封的環(huán)境，防止微生物的外逸，易于實(shí)驗(yàn)室的清潔消毒，同時(shí)避免外部對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的破壞?！秾?shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489－2008）及《生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范》（GB50346－2011）對(duì)不同級(jí)別的（A）BSL－3/4主實(shí)驗(yàn)室的氣密性指標(biāo)有明確規(guī)定，見(jiàn)表2。應(yīng)當(dāng)注意的是，不同于BSL－3實(shí)驗(yàn)室淋浴間屬于輔助工作區(qū)，《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489－2008）明確規(guī)定，適用于4．4．1的實(shí)驗(yàn)室淋浴室亦屬于防護(hù)區(qū)。

2 氣密性保證

2．1實(shí)驗(yàn)室裝修

????在（A）BSL－3/4實(shí)驗(yàn)室眾多的安全措施中，一級(jí)屏障和二級(jí)屏障尤為重要。一級(jí)屏障是操作者和被操作對(duì)象之間的隔離，二級(jí)屏障是生物安全實(shí)驗(yàn)室和外部環(huán)境的隔離。

????實(shí)驗(yàn)室在建設(shè)過(guò)程中應(yīng)將二級(jí)屏障做為實(shí)驗(yàn)室建設(shè)最重要的內(nèi)容。尤其是對(duì)于ABSL3（c）及以上級(jí)別實(shí)驗(yàn)室核心實(shí)驗(yàn)室具有氣密性打壓要求（表2），這就要求主實(shí)驗(yàn)室不僅在建造時(shí)選用可靠的裝修材料、遵循合理的施工方案、有效可行的實(shí)驗(yàn)室圍護(hù)結(jié)構(gòu)設(shè)備安裝方案，還要求在實(shí)驗(yàn)室竣工投入使用以后圍護(hù)結(jié)構(gòu)性能進(jìn)行定期維護(hù)和檢修。

????實(shí)驗(yàn)室裝修應(yīng)選擇優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，墻地面材料應(yīng)耐磨、抗腐蝕、易清潔?！秾?shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489－2008）明確要求：ABSL－3及以上級(jí)別實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)的圍護(hù)結(jié)構(gòu)內(nèi)表面應(yīng)光滑、耐腐蝕、防水，天花板、地板、墻間的交角應(yīng)為圓弧形，以易于清潔和消毒。地面應(yīng)防滲漏、完整、防滑，地面防護(hù)層應(yīng)連續(xù)到立面15cm處。實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)圍護(hù)結(jié)構(gòu)的所有縫隙，尤其是貫穿的縫隙都應(yīng)可靠密封。

????《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489－2008）對(duì)實(shí)驗(yàn)室潔凈度有明確規(guī)定，見(jiàn)表2。當(dāng)實(shí)驗(yàn)室墻體面板采用彩鋼板時(shí)需要注意，對(duì)于潔凈度要求高的房間若采用巖棉彩鋼板，該板在施工過(guò)程中及實(shí)驗(yàn)室投入使用時(shí)會(huì)產(chǎn)生巖棉碎屑，難以達(dá)到潔凈要求。另外對(duì)于ABSL－3及以上級(jí)別核心實(shí)驗(yàn)室，要求空氣壓力維持在－250Pa時(shí)，房間內(nèi)每小時(shí)泄露的空氣量應(yīng)不超過(guò)受測(cè)房間凈容積的10%［6］。混凝土或不銹鋼壁板在采用一定的技術(shù)手段情況下均能滿足打壓氣密要求，不銹鋼壁板在施工安裝過(guò)程中應(yīng)特別注意不同壁板之間的氣密連接。彩鋼板壁板性能及其安裝工藝目前尚不能滿足該級(jí)別實(shí)驗(yàn)室氣密性打壓要求。

2．2圍護(hù)結(jié)構(gòu)設(shè)備安裝

????用于實(shí)現(xiàn)二級(jí)屏障功能的實(shí)驗(yàn)室維護(hù)結(jié)構(gòu)設(shè)備包括生物安全氣密門(mén)、生物安全傳遞窗、高壓滅菌器、化學(xué)淋浴系統(tǒng)、雙原位高效過(guò)濾送排風(fēng)口等設(shè)備。這些設(shè)備的安裝氣密性是組成實(shí)驗(yàn)室氣密性的重要步驟，也是實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收檢測(cè)的重要內(nèi)容。目前國(guó)內(nèi)外高級(jí)別生物安全實(shí)驗(yàn)室均采用304以上不銹鋼質(zhì)的氣密門(mén)，氣密方式分為機(jī)械壓緊式和自動(dòng)充氣膨脹式，均能滿足需求。生物安全傳遞窗具有雙門(mén)互鎖，用于傳遞物品的普通型傳遞窗和用于傳遞工具的渡槽型傳遞窗?；瘜W(xué)淋浴是ABSL－3和ABSL－4實(shí)驗(yàn)室人員防護(hù)的重要設(shè)施。雙原位高效過(guò)濾送排風(fēng)口是實(shí)驗(yàn)室送排風(fēng)系統(tǒng)保證新風(fēng)供給和污染因子去除的重要保障。

????維護(hù)結(jié)構(gòu)設(shè)備安裝應(yīng)保證氣密性，氣密性標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)不低于所在區(qū)域的防護(hù)水平。三級(jí)和四級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室相鄰區(qū)域和相鄰房間之間應(yīng)根據(jù)需要設(shè)置傳遞窗，傳遞窗兩門(mén)應(yīng)互鎖，并應(yīng)設(shè)有消毒滅菌裝置，其結(jié)構(gòu)承壓及嚴(yán)密性應(yīng)符合所在區(qū)域的要求。我國(guó)已有專業(yè)公司掌握了該類設(shè)備安裝工藝，采用不銹鋼框架預(yù)埋或直接留洞安裝。其中預(yù)埋件安裝方式，氣密門(mén)、高壓滅菌器等尺寸較大的設(shè)備對(duì)土建留洞尺寸的精度要求較高，預(yù)埋完成后上下、左右誤差不能超過(guò)±5mm。設(shè)備相關(guān)水、電、氣管道在穿越維護(hù)結(jié)構(gòu)時(shí)應(yīng)使用專業(yè)管道穿墻密封器，以確保實(shí)驗(yàn)室墻體的完整性、防火性和氣密性。

3 氣密性檢測(cè)

????實(shí)驗(yàn)室建設(shè)完成以及涉及圍護(hù)結(jié)構(gòu)的設(shè)備安裝應(yīng)在安裝后使用專業(yè)的檢測(cè)方式進(jìn)行安裝密閉性檢測(cè)。目前通用的密閉性檢測(cè)方法包括壓力衰減法、皂液法和超聲波檢測(cè)法。對(duì)于規(guī)范中要求需打壓測(cè)試的核心實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行氣密性檢測(cè)時(shí)應(yīng)使用壓力衰減法，涉及圍護(hù)結(jié)構(gòu)的設(shè)備安裝可使用通用的三種檢測(cè)方法。

其中壓力衰減法即在施加一定正負(fù)壓力下，測(cè)試在一定時(shí)間之后的壓力變化?？捎脕?lái)檢測(cè)倉(cāng)體和設(shè)備安裝的氣密性。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室整體氣密性檢測(cè)時(shí)，封閉所有氣體進(jìn)出口；設(shè)備安裝氣密性檢測(cè)時(shí)，將設(shè)備安裝到密封艙體或密封房間內(nèi)，進(jìn)行加壓測(cè)試。記錄下檢測(cè)前的絕對(duì)壓力和檢測(cè)后的絕對(duì)壓力，以及檢測(cè)系統(tǒng)的體積和滲漏體積。每五分鐘進(jìn)行一次記錄。

????皂液法檢測(cè)法是在安裝界面涂抹一種可產(chǎn)生氣泡的溶液（一種工業(yè)試劑或洗滌劑、甘油和水三等份的混合溶液）。過(guò)一會(huì)但在溶液干之前，檢查涂濕的部位，在有氣泡的地方做出標(biāo)記。除非另有規(guī)定，泄露跡象是：一些1/16英寸（1．5mm）直徑的氣泡在1秒內(nèi)形成或1個(gè)9/32英寸（7．14mm）直徑的氣泡在一分鐘內(nèi)形成。

????超聲波控制器檢測(cè)法是采用超聲波控制器進(jìn)行密封性檢測(cè)。超聲檢漏方法可非常便捷有效的通過(guò)觀察檢漏儀的檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)弱，檢測(cè)泄漏的位置及泄漏量大?。▓D2）。

4 展望

????我國(guó)近年來(lái)許多地方和單位的實(shí)驗(yàn)室生物安全硬件得到較大改善，隨著實(shí)驗(yàn)室生物安全各項(xiàng)法律法規(guī)的貫徹執(zhí)行，對(duì)實(shí)驗(yàn)室硬件的要求也相應(yīng)提高。目前我國(guó)采用的實(shí)驗(yàn)室維護(hù)結(jié)構(gòu)設(shè)備包括生物安全氣密門(mén)、生物安全傳遞窗、化學(xué)淋浴系統(tǒng)等設(shè)備多數(shù)為國(guó)外進(jìn)口產(chǎn)品。進(jìn)口設(shè)備多為國(guó)外生產(chǎn)組裝在出廠前進(jìn)行性能包括設(shè)備氣密性能測(cè)試。但值得注意的是，我國(guó)有些在建實(shí)驗(yàn)室中化學(xué)淋浴間土建工程已經(jīng)完成，化學(xué)淋浴系統(tǒng)設(shè)備不得不拆分后再在淋浴間內(nèi)安裝重組。

????這種情況下應(yīng)特別注意安裝完成后對(duì)設(shè)備性能進(jìn)行逐項(xiàng)檢測(cè)，并由供應(yīng)商專業(yè)工程師全程負(fù)責(zé)。

????另外，圍護(hù)結(jié)構(gòu)設(shè)備重要的性能之一即是設(shè)備本身的氣密性，設(shè)備在頻繁使用過(guò)程中會(huì)造成零部件損耗及連接松弛等問(wèn)題。因此，加強(qiáng)對(duì)該類設(shè)備本身性能以及安裝界面的定期維護(hù)也是實(shí)驗(yàn)室氣密性保證的重要內(nèi)容。

配方一?瑞氏（Wright’s）染液
取瑞氏染料粉末0.1克和甲醇60毫升。把染料放在研缽內(nèi)，加少量甲醇研磨，使染料溶解，然后把溶解的染料倒入干凈的棕色玻璃瓶。并用完甲醇為止。配制好的染液在室溫中保存，即可使用。新鮮配制的染液偏堿性，放置后呈酸性，染液貯存愈久染色愈好。這染液的適宜pH值是6.4～6.8。因此，染色時(shí)加入緩沖液，可維持一定的酸堿度，使染色效果更好。
這種染液除能染血液，還能染瘧原蟲(chóng)。
瑞氏染料可以自制。在100毫升0.5%碳酸氫鈉水溶液里加入1克美藍(lán)，溶解后放在鍋內(nèi)，蒸上1小時(shí)，取出冷卻后過(guò)濾。在濾液里加入0.1%伊紅水溶液500毫升，隨加、隨攪拌，使混合液呈紫色。靜置一夜后，用濾紙過(guò)濾。濾紙上的沉淀物，在室內(nèi)風(fēng)干或放在干燥箱內(nèi)，充分干燥后研磨成粉末，即成瑞氏染料。

配方二?甲基紫染液
取甲基紫0.5克，加到100毫升生理鹽水中，溶解后加入冰醋酸0.02毫升。

配方二?纖維素細(xì)胞壁染液（Ⅱ）
氯化鋅?20克?碘化鉀?6.5克
碘?1.5克?蒸餾水加至100毫升
先把氯化鋅溶于少量蒸餾水中，再加入6.5克碘化鉀，在碘完全溶解后，用蒸餾水稀釋到100毫升，即成碘-氯化鋅溶液。
該染液能把細(xì)胞壁染成紫色，胞質(zhì)染成淡黃色，胞核染成棕色。

配方三?纖維素細(xì)胞壁染液（Ⅲ）
甲液?取1克碘和1.5克碘化鉀，溶于100毫升蒸餾水中，即成1%碘液。
乙液?取7份硫酸和3份蒸餾水相混，即成66.5%硫酸溶液。
染色時(shí)，在材料上滴加甲液，再加一滴乙液，纖維素細(xì)胞壁就染成黃色。

配方四?木質(zhì)化細(xì)胞壁染液（Ⅰ）
硫酸化苯胺（或鹽酸話本安）?1份
蒸餾水?70份?95%酒精?30份
硫酸?30份
將上述各組分相混，將細(xì)胞材料放入混合液里染色，可是木質(zhì)化細(xì)胞壁呈鮮黃或姜黃色。

配方五?木質(zhì)化細(xì)胞壁染液（Ⅱ）
取間苯三酚4～5克，溶于100毫升95%酒精中，即成間苯三酚-酒精液。
先在材料上滴上1滴濃鹽酸，然后滴上間苯三酚-酒精液1滴，木質(zhì)化的細(xì)胞壁就染上櫻紅或紫紅色。

配方六?木質(zhì)化細(xì)胞壁染液（Ⅲ）
取1克番紅，溶于99毫升蒸餾水中，即成1%番紅溶液。

配方二?任氏（Ringer’s）生理鹽水
氯化鈉?6.5克?碳酸氫鈉?0.2克
氯化鉀?0.14克?磷酸二氫鈉?0.01克
氯化鈣?0.12克
先把氯化鈉、氯化鉀、碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉分別溶解在少量蒸餾水中，混合后用蒸餾水稀釋到980毫升。然后取氯化鈣溶解在20毫升蒸餾水中，把氯化鈣溶液逐滴加入到上述溶液內(nèi)，邊滴、邊攪拌，以免產(chǎn)生不溶解的磷酸鈣沉淀。
此溶液用于變溫動(dòng)物，尤其常用于兩棲類。

配方三?樂(lè)氏（Locke’s）生理鹽水
氯化鈉?9.0克?碳酸氫鈉?0.1～0.3克
氯化鉀?0.42克?氯化鈣?0.24克
把氯化鈉、氯化鉀、碳酸氫鈉分別用少量蒸餾水溶解，混合后加蒸餾水到980毫升。把氯化鈣溶解在20毫升蒸餾水里，逐滴加入上述溶液中。
以上溶液用于恒溫動(dòng)物，尤其常用于哺乳類。

配制的方法是先分別配制1%中性紅溶液和1%甲基藍(lán)溶液，這兩種溶液各取1份混合，用來(lái)鑒定細(xì)胞的死活。該試劑使活細(xì)胞的液泡染上紅色，而使死細(xì)胞全部染成藍(lán)色。

檢查二氧化碳的試劑，可用溴代麝香草酚藍(lán)溶液和石灰水。
配方一?溴代麝香草酚藍(lán)溶液
取0.1克溴代麝香草酚藍(lán)，溶解在100毫升蒸餾水里，滴入少量0.1%氫氧化鉀溶液，使它成為弱堿性溶液而呈藍(lán)色。
溴代麝香草酚藍(lán)溶液pH值變色范圍是6.0（黃）～7.6（藍(lán)）。待測(cè)物中如果有二氧化碳，會(huì)形成碳酸而使溶液變成黃色。

配方二?石灰水
在蒸餾水中加入生石灰（氧化鈣），變加邊攪拌，直到加入的生石灰不再溶解，呈飽和狀態(tài)時(shí)為止。在石灰水澄清后，傾出上層清液，用濾紙過(guò)濾，放在密閉瓶?jī)?nèi)保存。
如果測(cè)定的物質(zhì)中有二氧化碳，會(huì)生成碳酸鈣，使石灰水變渾濁。

蘇丹Ⅲ（Ⅳ）酒精飽和溶液
取0.2克蘇丹Ⅲ（或蘇丹Ⅳ），放入純酒精中，加熱，使它充分溶解，成為飽和酒精溶液，過(guò)濾后密閉在試劑瓶?jī)?nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>The post 檢查脂肪的試劑配置方法 first appeared on 上海光語(yǔ)生物科技有限公司.]]> http://weneedholiday.cn/check-fat.html/feed 0 http://weneedholiday.cn/check-protein.html http://weneedholiday.cn/check-protein.html#respond Wed, 08 Oct 2014 09:21:03 +0000 http://weneedholiday.cn/?p=2818 定性檢驗(yàn)蛋白質(zhì)的常用試劑配置方法如下： 米倫（Millon）試劑和 雙縮尿試劑

取6克碘化鉀溶于20毫升蒸餾水中，攪拌到溶解后，加入4克碘，等碘充分溶解，在加入80毫升蒸餾水，貯存在棕色試劑瓶?jī)?nèi)。
碘液用來(lái)測(cè)試食物樣品或葉片中的淀粉，也用作染色劑，例如可染色鞭毛、纖毛和細(xì)胞核等。