若將硅藻置于顯微鏡下觀察,常常會被它們精致的幾何外形震撼:有的如精雕細(xì)琢的圓形玉璧,有的似纖細(xì)修長的玻璃針,還有些像綴滿花紋的星形首飾。這些令人驚嘆的結(jié)構(gòu),源自它們獨特的細(xì)胞壁——由二氧化硅(SiO?)構(gòu)成的透明外殼,宛如為單細(xì)胞生物量身定制的玻璃盔甲。
這層盔甲不僅是美學(xué)杰作,更是生存利器。硅質(zhì)細(xì)胞壁的硬度能抵御捕食者的攻擊,其多孔結(jié)構(gòu)則方便營養(yǎng)物質(zhì)交換。但如此精密的構(gòu)造需要持續(xù)的材料供給,這就是硅酸鈉登上舞臺的原因。溶于水后,硅酸鈉釋放的硅酸根離子(SiO?2?),如同運送至建筑工地的磚塊,被硅藻細(xì)胞內(nèi)的特殊酶轉(zhuǎn)化為二氧化硅,層層堆砌成那標(biāo)志性的外殼。
20世紀(jì)70年代,海洋學(xué)家Guillard研制的F/2培養(yǎng)基本是針對甲藻、綠藻等設(shè)計的“通用營養(yǎng)方案”。其標(biāo)準(zhǔn)配方包含氮、磷、維生素等基礎(chǔ)元素,卻獨獨遺漏了硅元素——因為大多數(shù)藻類并不需要它。這個被忽視的細(xì)節(jié),卻在硅藻培養(yǎng)中埋下了關(guān)鍵隱患:沒有硅源供給,硅藻就像失去水泥的建筑隊,空有藍(lán)圖卻無從施工。
這一設(shè)計特點導(dǎo)致了一個有趣的實驗室現(xiàn)象:新手培養(yǎng)硅藻時,常困惑于藻液莫名渾濁、細(xì)胞大量破裂。直到他們翻開配方手冊,才會恍然發(fā)現(xiàn)那個被遺忘的步驟——添加硅酸鈉。這個發(fā)現(xiàn)過程,幾乎是每個藻類研究者必經(jīng)的“成長儀式”。
在實驗室實踐中,硅酸鈉的添加遠(yuǎn)非“一倒了之”這么簡單。它的使用需要兼顧科學(xué)精確性與操作藝術(shù)性:
1. 濃度把控
常規(guī)添加量為每升培養(yǎng)基30毫克九水合硅酸鈉(Na?SiO?·9H?O),相當(dāng)于0.1毫摩爾濃度。但這個數(shù)值并非鐵律:培養(yǎng)骨條藻等生長旺盛的硅藻時,濃度可能需要提升至0.2-0.3毫摩爾;而培養(yǎng)某些淡水硅藻時,過量硅酸鹽反而會抑制生長。經(jīng)驗豐富的實驗員會像品酒師調(diào)整配方般,根據(jù)藻種特性微調(diào)濃度。
2. 防沉淀訣竅
硅酸鈉與培養(yǎng)基中的磷酸鹽是“天生的冤家”,二者相遇極易生成乳白色絮狀沉淀。為此,實驗室流傳著兩個經(jīng)典對策:
– 分裝滅菌法:將硅酸鈉溶液單獨滅菌,待培養(yǎng)基冷卻至50℃以下時再混合
– 母液冷藏法:配制高濃度硅酸鈉母液冷藏保存,使用前按比例稀釋加入
3. 動態(tài)補給機制
在高密度培養(yǎng)中,硅藻對硅的消耗速度可能超乎想象。曾有研究顯示,三角褐指藻在指數(shù)生長期,12小時內(nèi)就能耗盡培養(yǎng)基中90%的硅酸鹽。因此,持續(xù)培養(yǎng)時需要像監(jiān)測血糖般定期檢測硅濃度,適時補加硅源。
有趣的是,自然界的硅藻早已掌握高效利用硅的生存智慧。在海洋表層,硅藻僅占浮游植物總量的15%,卻貢獻(xiàn)了全球40%的海洋初級生產(chǎn)力。它們進(jìn)化出的硅吸收系統(tǒng)能在低硅環(huán)境下主動捕獲離子,甚至能溶解沉積物中的硅酸鹽。這種“環(huán)境適應(yīng)術(shù)”給實驗室培養(yǎng)帶來啟示:通過模擬自然界的硅波動(如周期性補硅),可能更有利于某些硅藻品系的長期穩(wěn)定培養(yǎng)。
下次當(dāng)你在顯微鏡下觀察硅藻的精致花紋時,不妨想象那些曾以離子狀態(tài)游走的硅元素,如何在生命之手的編織下,成就了微觀世界的建筑奇跡。這或許正是科學(xué)研究最動人的一面——在試管與燒杯之間,重演著地球生命演化的壯麗詩篇。
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Stock1 | 試劑 | per?100mL? |
? | NaNO3 | 7.50g |
Stock2 | 試劑 | per?100mL? |
? | NaH2PO4·H2O | 0.50g |
Stock3 | 試劑 | per?100mL? |
? | Na2SiO3·9H2O | 3.00g |
微量元素儲備液 | 試劑 | ? | per?1000mL |
? | CuSO4·5H2O | 0.98g/100ml | 1ml |
? | ZnSO4·7H2O | 2.20g/100ml | 1ml |
? | CoCl·6H2O | 1.00g/100ml | 1ml |
? | MnCl2·4H2O | 18.0g/100ml | 1ml |
? | Na2MoO4·2H2O | 0.63g/100ml | 1ml |
? | Na2EDTA | ? | 4.36g |
? | FeCl3·6H2O | ? | 3.15g |
? | Distilled?water | ? | 1000mL |
vitamin | 試劑 | per?100mL? | ? |
? | B1 | 10mg | ? |
? | Biotin | 0.05mg | ? |
? | B12 | 0.05mg | ? |
Medium | ? | per?1L |
? | 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 1000mL |
? | Stock?solution?1 | 1.0mL |
? | Stock?solution?2 | 1.0mL |
? | Stock?solution?3 | 1.0mL |
? | 微量元素儲備液 | 1.0mL |
? | vitamin | 1.0mL |
基礎(chǔ)培養(yǎng)基(f/2)可加緩沖液或用酸堿調(diào)pH7.6-7.8,再將滅菌后的儲備液,微量元素及維生素按要求加入。維生素不能高溫滅菌,可用0.22μm膜過濾。
基礎(chǔ)培養(yǎng)基(f/2)成分:(即人工海水配方)
試劑 | per?1L | per?5L | per?10L |
NaCl | 21.1939g | 105.9695g | 211.939g |
NaSO4 | 3.55g | 17.75g | 35.5g |
KCl | 0.5993g | 2.9965g | 5.993g |
NaHCO3 | 0.2935g | 1.4675g | 2.935g |
KBr | 0.08627g | 0.43135g | 0.8627g |
H3BO3 | 0.02297g | 0.11485g | 0.2297g |
NaF | 0.00275g | 0.01375g | 0.0275g |
MgCl2·6H2O | 9.5922g | 47.961g | 95.922g |
CaCl2 | 1.0143g | 5.0715g | 10.143g |
SrCl2·6H2O | 0.02186g | 0.1093g | 0.2186g |
注意:基礎(chǔ)人工海水配方也可以用曬干海鹽代替。
f/2 medium?pdf 下載
F/2還有很多衍生培養(yǎng)基配方,例如F/2+NPM , f/4等等,如需了解更多,可以點擊f/2衍生培養(yǎng)基
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