目前最流行的測定光合速率的方法是通過測定CO2吸收的紅外線CO2氣體分析儀法(光合儀)以及通過測定O2釋放的氧電極法。然而,究竟那一種方法測定準(zhǔn)確,什么樣的方法才是最適合自己實(shí)驗(yàn)的方法呢?
光合儀和氧電極測定光合速率的區(qū)別:
用氧電極測定的光合速率要大于用光合儀測定的光合速率。
根據(jù)光合作用的總反應(yīng)式:
CO2?+ 2H2O*?+ 4.69kJ → (CH2O) +?O*2↑+ H2O
無論用氧電極測定O2的釋放還是用光合儀(紅外線CO2氣體分析儀法)測定CO2的吸收測定光合速率應(yīng)該相同,然而實(shí)際情況并非如此。
光合作用過程中每生成一個(gè)O2分子將會(huì)有四個(gè)電子進(jìn)入電子傳遞鏈,經(jīng)過電子傳遞體的電子傳遞過程,傳遞給NADPH,NADPH和ATP還原一個(gè)CO2分子,這種情況下是相等的。然而,電子經(jīng)電子傳遞鏈后并非都將電子傳遞給NADPH。部分電子傳給氧,進(jìn)入米勒反應(yīng),還有部分電子用在氮(N)代謝和硫(S)代謝和光呼吸過程中,在逆境條件下用來非還原CO2的電子比例增加。因此,實(shí)際情況下并非是每釋放一個(gè)O2分子就吸收一個(gè)CO2分子。
再者液相氧電極測定O2的釋放過程是在NaHCO3溶液中進(jìn)行的,NaHCO3溶液提供飽和CO2,且消除了氣孔限制對光合速率的影響。氣相氧電極測定O2的釋放也是在飽和CO2條件下測定,還有就是氧電極測定光合速率是在離體條件下測定。而光合儀(紅外線CO2氣體分析儀法)測定CO2的吸收,受到氣孔和CO2濃度的限制,因此用光合儀和氧電極測定的光合速率的的大小是不一致的。一般來說,用氧電極測定的光合速率要大于用光合儀測定的光合速率。
光合儀和氧電極測定光合速率各自的特點(diǎn):
氧電極
氧電極測定的光合速率不能真正反映植物在實(shí)際條件下的碳同化速率。但在某些研究中,人們需要知道植物的放氧速率,比較植物放氧和同化CO2速率的差異,從而了解光合電子在不同途徑的分配情況。加入不同的抑制劑,可以研究光合電子傳遞途徑,氧電極法除了可以測定光合速率外,還可以用于測定各種生物體及活性物質(zhì)的耗氧或放氧反應(yīng),例如可以測定某些酶的活性及呼吸途徑的研究,并且能夠很好地控制反應(yīng)條件。用氧電極測定光合速率可以消除氣孔限制對光合的影響,為科研提供有力的數(shù)據(jù)支持。最重要的一點(diǎn)就是應(yīng)用液相氧電極,可以測定一些光合儀不能測定的小的植物材料如藻類、苔蘚類、浮游植物、懸浮細(xì)胞、芽、莖等的光合速率。
然而,作為光合速率的測定方法,氧電極法測定指標(biāo)單一,不能測定氣孔導(dǎo)度、蒸騰速率、CO2補(bǔ)償點(diǎn)、CO2飽和點(diǎn)等光合作用重要參數(shù)。
用氧電極研究植物的光合速率目前主要的產(chǎn)品有英國Hansatech科學(xué)儀器公司生產(chǎn)的Chlorolab系列及Oxygraph等型號的液相氧電極和Leaflab系列的氣相氧電極,美國Yellow Springs儀器有限公司生產(chǎn)的YSI-53型生物氧監(jiān)測儀等。
光合儀
很多剛?cè)雽W(xué)的研究生會(huì)覺得光合儀就是測定光合速率,我當(dāng)時(shí)也是這么想的,其實(shí)不然,光合儀有著廣泛的用途。
光合儀用來從事植物葉片光合作用、蒸騰作用、呼吸作用等相關(guān)研究。測量參數(shù)包括CO2濃度、凈光合速率、蒸騰速率、胞間CO2濃度、氣孔導(dǎo)度、大氣濕度、空氣溫度、葉片溫度、蒸汽壓虧缺、大氣壓、光強(qiáng)、、Ci/Ca等,并且通過系統(tǒng)自帶的自動(dòng)測量程序測定植物的光—光合響應(yīng)曲線、CO2—光合響應(yīng)曲線、溫度—光合響應(yīng)曲線、濕度—光合響應(yīng)曲線等各種響應(yīng)曲線的測定,并且可以通過這些響應(yīng)曲線計(jì)算出RuBP羧化效率、表觀量子產(chǎn)量、光補(bǔ)償點(diǎn)、飽和光強(qiáng)、CO2補(bǔ)償點(diǎn)、CO2飽和點(diǎn)、溫度補(bǔ)償點(diǎn)、RuBP最大再生速率以及光合作用氣孔限制值等一些非常有用的生理生態(tài)參數(shù)。通過對測定條件的控制我們還可以研究能量的分配以及光呼吸。
目前被廣泛使用的光合儀一般都采取開放式氣路設(shè)計(jì)開放式氣路系統(tǒng)采用雙氣室紅外儀,使未經(jīng)過同化室的氣體作為參比氣進(jìn)入一個(gè)氣室,使從同化室出來的氣體作為樣本氣進(jìn)入另一個(gè)氣室,由紅外監(jiān)測器檢測出參比氣和樣本氣的CO2濃度差,根據(jù)其濃度差、同化室中葉片面積和氣體流量計(jì)算出光合速率。由于該方法快速、準(zhǔn)確,又彌補(bǔ)了密閉式氣路系統(tǒng)的一些不足,所以應(yīng)用越來越普及。
然而,光合儀由于受葉室類型的限制不方便測定藻類、苔蘚類以及小的浮游植物,懸浮細(xì)胞、蘋果果皮,幼芽等材料的光合速率。
常見的光合儀有美國(原英國)PP Systems公司的CIRAS-2型便攜式光合儀以及Licor公司的光合儀。