綜合一些資料和經(jīng)驗,介紹接種藻類計數(shù)的方法,以扁藻為例介紹幾種計數(shù)方法和生長曲線制作方法
1、細(xì)胞計數(shù)法
計數(shù)板計數(shù)法:混勻藻液,取出一定量的藻液,滴入一滴甲醛固定扁藻細(xì)胞,用血球計數(shù)板計數(shù),每個樣品須重復(fù)測定3次,計算每毫升藻液所含細(xì)胞數(shù)的平均值。每毫升藻液所含的細(xì)胞數(shù)(細(xì)胞密度)按下式計算:
每毫升藻液細(xì)胞數(shù)=計數(shù)平均值×10,000×稀釋倍數(shù) (2-1)
2、干重法
取一定體積的藻液,用玻璃纖維濾紙(Whatman GF/C)過濾獲得藻細(xì)胞沉淀,將沉淀放入80℃烘箱中烘干至恒重,稱量,藻細(xì)胞的質(zhì)量即等于稱量結(jié)果減去濾紙的質(zhì)量。
3、光密度法
混勻藻液,取3 ml藻液放入1 cm光徑比色皿中,以不含扁藻細(xì)胞的培養(yǎng)基為空白對照,在Jasco V-530型紫外可見分光光度計下取其特征吸收峰測定OD值(綠藻一般為680,665,450 nm)。
先稀釋出不同濃度的藻液,用分光光度計測定其吸光度值,然后根據(jù)各組數(shù)據(jù)生成工作曲線,之后就只用測吸光度了。關(guān)鍵還是要選擇合適的波長,培養(yǎng)液最好不要有雜色。硅藻含類胡蘿卜素較多,用440nm就可以。
吸光度測出來數(shù)據(jù)要求跟細(xì)胞密度有關(guān),細(xì)胞在各個時期的葉綠素含量是不同的,細(xì)胞密度也是不同的,680測出來就亂了。
?如果做生長曲線的話可以每天的同一時候取樣,也可以隔天取樣。??我們用1mL的藻液就夠了,?必要時候600微升都行,不能再少了。