茵衣藻是一種模型綠色微藻,能夠利用醋酸異養(yǎng)生長(zhǎng)。盡管含有完整的β氧化基因,但不能在脂肪酸上生長(zhǎng)。最近的報(bào)道表明,藻類優(yōu)先隔離而不是分解脂酰鏈,來(lái)用作快速重建膜。我們收集了一系列過(guò)氧化物酶體生物發(fā)生所需的潛在衣藻過(guò)氧化物素(PEXs),以表明萊茵衣藻具有一套完整的過(guò)氧化物酶體生物發(fā)生因子。為了確定過(guò)氧化物酶體參與外源性脂肪酸的代謝,我們檢測(cè)了在不同營(yíng)養(yǎng)條件下表達(dá)與過(guò)氧化物酶體蛋白N端或c端肽融合的熒光蛋白,同時(shí)加入熒光標(biāo)記的棕櫚酸。在光照和黑暗,有或者沒(méi)有乙酸作為碳源的條件下,使用共聚焦顯微鏡跟蹤過(guò)氧化物酶體。在細(xì)胞中,鑒定了四個(gè)主要的隔間,包括: (1)乙醛酸循環(huán)酶標(biāo)記和含有過(guò)氧化物酶體靶向信號(hào)1(PTS1)三肽但缺乏脂肪酸標(biāo)記,(2)脂肪酸標(biāo)記,(3)乙醛酸循環(huán)酶標(biāo)記,(4)PTS1標(biāo)記。不到5%的隔間同時(shí)含有脂肪酸和過(guò)氧化物酶體標(biāo)記物。對(duì)光學(xué)切片圖像的統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn),萊茵衣藻在細(xì)胞中同時(shí)攜帶不同的過(guò)氧化物酶體群體,并根據(jù)光照條件調(diào)節(jié)過(guò)氧化物酶體的含量。另一方面,無(wú)論培養(yǎng)條件如何,同時(shí)含有脂肪酸和過(guò)氧化物酶體標(biāo)記物的隔室的比例都沒(méi)有顯著變化。結(jié)果表明,β-氧化在萊茵衣藻的過(guò)氧化物酶體群體中可能發(fā)生率較小,這支持了藻類中脂肪酸的主要代謝偏好是脂質(zhì)生物合成而不是β-氧化的觀點(diǎn)。
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近年來(lái),南美白對(duì)蝦早期死亡綜合癥(EMS)一直困擾著整個(gè)對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè),“EMS”還是導(dǎo)致對(duì)蝦養(yǎng)殖早期高死亡率、高排塘率的主要原因。對(duì)蝦的“EMS”與藻毒素有著千絲萬(wàn)縷的聯(lián)系,采取切實(shí)可行的措施,控制好藻毒素,才是減少對(duì)蝦早期死亡綜合癥的主要途經(jīng)。
藻類對(duì)南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖的影響:
1.藻類都具有產(chǎn)氧功能,也包括令養(yǎng)蝦戶頭疼的藍(lán)藻。當(dāng)前最大的問(wèn)題是,當(dāng)單一藻類大量繁殖時(shí),會(huì)釋放出藻毒素,直接導(dǎo)致水體溶氧迅速降低,造成的南美白蝦的應(yīng)激性反應(yīng)。當(dāng)出現(xiàn)單一藻類大量繁殖的情況時(shí),需要引起我們的重視。
2.在眾多藻類毒素中,藍(lán)藻微囊藻毒素對(duì)白對(duì)蝦肝胰臟的損傷是不容置疑的,同時(shí)也是造成南美白對(duì)蝦肝胰腺壞死、腸炎、偷死的主要原因之一。水中藻類問(wèn)題導(dǎo)致對(duì)蝦大量死亡的現(xiàn)象也時(shí)有發(fā)生,對(duì)水中藻類的控制已經(jīng)成為水質(zhì)管理的重點(diǎn)之一。
藻毒素產(chǎn)生的原因:
1、水體富營(yíng)養(yǎng)化是藻毒素發(fā)生的物質(zhì)基礎(chǔ)和首要條件,養(yǎng)殖水質(zhì)自身污染也是誘發(fā)有害藻類大量繁殖的原因之一。
2、倒藻影響。倒藻出現(xiàn)時(shí)會(huì)導(dǎo)致水色驟然變清、變濁、甚至變紅。發(fā)生“倒藻”時(shí),首先溶解氧會(huì)下降,二氧化碳會(huì)增加,pH值迅速下降;其次大量的死藻分解,會(huì)加大耗氧,還會(huì)產(chǎn)生氨氮和亞硝酸鹽;水中的原生物會(huì)大量繁殖,直接導(dǎo)致對(duì)蝦藻類毒素中毒、缺氧、發(fā)病、死亡。
如何控制藻毒素過(guò)度繁殖:
1.做好肥水育藻是最關(guān)鍵的第一步。改變傳統(tǒng)的肥水方式,少施有機(jī)肥,合理施用生物肥,主動(dòng)控制少藻和不倒藻。
2.堅(jiān)持“以菌養(yǎng)藻”。定期投放有益微生物制劑,如光合細(xì)菌、EM菌、乳酸菌、芽孢桿菌,通過(guò)生態(tài)競(jìng)爭(zhēng),降解進(jìn)入水體中的有機(jī)耗氧,凈化水質(zhì),平衡藻相和菌相。
3.提高底部溶解氧。溶解氧是評(píng)價(jià)水質(zhì)穩(wěn)定的重要標(biāo)準(zhǔn),在對(duì)蝦養(yǎng)殖中后期增大溶氧量,尤其是凌晨池水溶解氧為最低時(shí),是常見的降低水體氨氮、亞硝酸鹽含量的有效措施。
堅(jiān)持使用膽汁酸拌料,雖然現(xiàn)在藻毒素?zé)o藥可徹底降解,但我們可以通過(guò)拌料使用膽汁酸起到促進(jìn)對(duì)蝦肝胰腺排毒解毒的作用,同時(shí)強(qiáng)健對(duì)蝦肝胰腺功能,提高對(duì)蝦體質(zhì),預(yù)防因藻毒素引起的腸炎、偷死、白便等肝胰腺疾病。
有害藻的大量生長(zhǎng)說(shuō)明水環(huán)境已經(jīng)出現(xiàn)問(wèn)題,因此對(duì)不同的有害藻類的不同時(shí)期可采用不同的方案進(jìn)行處理,但對(duì)于毒性比較大的藻類,換水還是最佳選擇??刂茖?duì)蝦藻毒綜合癥,是對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的重要舉措。
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產(chǎn)品分類液體菌劑以有機(jī)、無(wú)機(jī)原料培養(yǎng)液接種光合細(xì)菌,經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)而成的光合細(xì)菌菌液。
固體菌劑由某種固體物質(zhì)作為載體吸附光合細(xì)菌菌液而成。
施用方法生產(chǎn)的光合細(xì)菌肥料一般為液體菌液,用于農(nóng)作物的基肥、追肥、拌種、葉面噴施、秧菌蘸根等。
作種肥使用,可增加生物固氮作用,提高根際固氮效應(yīng),增進(jìn)土壤肥力。
葉面噴施,可改善植物營(yíng)養(yǎng),增強(qiáng)植物生理功能和抗病能力,從而起到增產(chǎn)和改善品質(zhì)的作用。
作果蔬保鮮劑,能抑制病菌引起的病害,對(duì)西瓜等的保存有良好的作用。光合細(xì)菌防止病害的主要原因是因?yàn)樗哂袣⒕饔?,能抑制其他有害菌群及病毒的生長(zhǎng)。
此外,在畜牧業(yè)上應(yīng)用于飼料添加劑,畜禽糞便的除臭,有機(jī)廢棄物的處理上均有較好的應(yīng)用前景。
由于光合細(xì)菌應(yīng)用歷史比較短,許多方面的應(yīng)用研究還處在初級(jí)階段,還有大量的、深入的研究工作要做。尤其是這一產(chǎn)品的質(zhì)量、標(biāo)準(zhǔn)以及進(jìn)一步提高應(yīng)用效果等方面基礎(chǔ)薄弱,有待進(jìn)一步加強(qiáng)。目前的研究和試驗(yàn)已顯示出光合細(xì)菌作為重要的微生物資源,其開發(fā)應(yīng)用的前景是廣闊的,必將具有不可替代的應(yīng)用市場(chǎng),在人類活動(dòng)中必將發(fā)揮越來(lái)越大的作用。
光合細(xì)菌簡(jiǎn)稱PSB是在厭氧條件下, 能夠進(jìn)行不放氧光合作用的一類細(xì)菌的總稱。屬于水圈微生物的一種, 廣泛分布于水田、池塘及江河湖海中,尤其在有機(jī)物污染的積水(如糞便、堆肥污水等)處較多。光合細(xì)菌包括綠硫細(xì)菌、紅硫細(xì)菌、紅螺菌三個(gè)科, 其中紅螺科的一些屬(如紅假單胞屬)能在厭氧光照、好氧黑暗條件下迅速利用低分子有機(jī)物, 故可用來(lái)處理有機(jī)廢水。
2.研究概況
自60年代起, 日本小林正泰等首先進(jìn)行了用PSB菌處理有機(jī)廢水方面的研究, 先后成功地利用光合細(xì)菌對(duì)糞尿、食品行業(yè)污水、淀粉生產(chǎn)污水、皮革及以豆制品生產(chǎn)中所產(chǎn)生的有機(jī)廢水進(jìn)行了處理, 取得了成功的經(jīng)驗(yàn)。近年來(lái)中國(guó)也已對(duì)高合成脂肪廢水、豆制品、洗毛廢水及檸檬酸、味精等中、高濃度廢水進(jìn)行了研究和成功運(yùn)作。而且不僅采用PSB占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)的活性污泥法, 同時(shí)采用制用載體進(jìn)行接觸氧化法的運(yùn)作也取得了較大的成功。在利用PSB處理高濃度廢水如味精廢水經(jīng)過(guò)三段接觸氧化法, 利用PSB菌群, 將COD從幾萬(wàn)降至2-3千mg/L不僅突破了傳統(tǒng)的采用厭氧處理后才能將COD從幾萬(wàn)降至幾千的做法, 同時(shí)將作為一種優(yōu)勢(shì)菌與其它優(yōu)勢(shì)菌結(jié)合, 可以廣泛應(yīng)用在食品、印染、制革、造紙等具有可生化性能的污水處理上。
3.PSB處理有機(jī)廢水的原理
從廢水中分離出來(lái)的PSB是紅螺菌科的一些細(xì)菌種, 其細(xì)胞可進(jìn)行光合磷酸化和光氧化還原反應(yīng), 在好氧黑暗條件下, 紅螺菌缺少這種載色體, 此時(shí)它通過(guò)三梭酸循環(huán)來(lái)進(jìn)行有機(jī)酸代謝, 但當(dāng)轉(zhuǎn)變成厭氧光照時(shí)又很快形成載色體。這種隨生長(zhǎng)條件變化而靈活地改變代謝類型的特性, 使PSB在厭氧光照、黑暗好氧、明亮好氧的條件下均可降解有機(jī)物, 而且它所要求的條件也不像一般的專屬好氧菌和專屬厭氧菌那樣嚴(yán)格。由于在好氧條件下產(chǎn)酸的速率明顯高于厭氧產(chǎn)酸的發(fā)酵的速率, 且PSB生長(zhǎng)較快, 分解能力較大, 故在好氧設(shè)施使用PSB降解有機(jī)物更為有利, 它不僅比單一的專屬細(xì)菌具有較高生長(zhǎng)率, 同時(shí)在不同環(huán)境條件下都能發(fā)揮其特殊的作用。對(duì)于酸化水解工藝加上好氧曝氣處理有機(jī)廢水來(lái)源, 通過(guò)兼性厭氧菌的作用將長(zhǎng)鏈有機(jī)物轉(zhuǎn)化成低級(jí)脂肪酸等小分子有機(jī)物, 再在好氧條件下, PSB生物降解有機(jī)物的能力比常規(guī)的好氧菌具有較高的處理效率, 它將使好氧生化池的容積大幅度減小, 降低工程投資, 具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
PSB與其它菌種共同生存時(shí)同樣具有較高的優(yōu)勢(shì)。在自然水體中紅螺菌是與其它養(yǎng)菌共生的, 而且有機(jī)物越多的地方如魚塘、沼澤、淤泥堆積等地,紅螺菌會(huì)更多, 因此只要廢水中的水質(zhì)、溶解氧、停留時(shí)間合適, 光合細(xì)菌就會(huì)保持一定的優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng), 在生化反應(yīng)池中的微生物菌群與降解過(guò)程中相應(yīng)的微生物菌群交替演繹使得生物降解在更高的狀態(tài)下進(jìn)行。因此, 只要投加的菌種是生物降解所必需的, 或能協(xié)同降解有機(jī)物的微生物, 均可使PSB菌處于一種高效的狀態(tài), 提高處理效果。
4.處理有機(jī)廢水的特點(diǎn)
a、處理中低濃度的廢水時(shí), 同樣具有處理高濃度有機(jī)廢水的特點(diǎn),BOD 負(fù)荷高??筛哌_(dá)5kg/m3·d以上, 同時(shí)由于投加了其它菌種, 同樣具有一般接觸氧化法的特點(diǎn), 出水BOD很低。
b、耐沖擊負(fù)荷,BOD 負(fù)荷大幅變化, 出水處理效果不受影響。
c、重新運(yùn)行靈活
在將PSB菌進(jìn)行接觸氧化法時(shí), 不需污泥回流, 吸附在載體上時(shí), PSB菌種生長(zhǎng)性能好, 重新檢修時(shí), 恢復(fù)正常運(yùn)行啟動(dòng)較快。
e、PSB耐高鹽分, 是一種可降解油脂、脫硫、脫氮、脫磷的廣譜細(xì)菌, 在和不同的細(xì)菌協(xié)同作用下,可以處理多種有機(jī)廢水。
f、對(duì)溫度變化不敏感, 在低溫狀態(tài)下, 仍然能達(dá)到一定的處理效果。
g、污泥量少, 易于分離。作用于載體上時(shí), 污泥量比單純的活性污泥法的污泥產(chǎn)量大幅度減少。
5.結(jié)論
光合細(xì)菌在污水處理中, 能有效地提高處理效率, 它不僅對(duì)高濃度有機(jī)廢水水質(zhì)具有良好的處理效果, 而且與其它優(yōu)勢(shì)菌協(xié)同處理低濃度廢水時(shí)同樣能取得較理想的效果, 而且能降低基建投資, 減少運(yùn)行成本。是具有實(shí)用價(jià)值的處理方式。
The post 光合細(xì)菌在污水處理中的應(yīng)用 first appeared on 上海光語(yǔ)生物科技有限公司.]]>1.?在水產(chǎn)養(yǎng)殖和畜禽養(yǎng)殖領(lǐng)域的應(yīng)用。凈化養(yǎng)殖塘水質(zhì)。PSB可以抑制綠藻等有害微生物的生長(zhǎng),降解有害有機(jī)物,增加水體氧氣,減少水生動(dòng)物的病害。作為水產(chǎn)養(yǎng)殖和畜禽養(yǎng)殖的飼料或飼料添加劑。PSB蛋白質(zhì)含量>60%,并含有16種氨基酸,各種B族維生素、促生長(zhǎng)因子、輔酶Q、抗病毒因子和色素等,是一種營(yíng)養(yǎng)豐富的飼料或飼料添加劑。這種飼料是一種典型的單細(xì)胞蛋白(SCP)。水產(chǎn)養(yǎng)殖用每畝水面每次投放10升(凈化水質(zhì)用1-3次,魚飼料用應(yīng)多少投放),飼料或添加劑用按1-3%添加到動(dòng)物飼料或飲水中。
2.?在種植業(yè)上的應(yīng)用。PSB作為微生物肥料增強(qiáng)作物的光合作用,改良土壤,提高作物的固氮能力,促進(jìn)生根、花芽形成、果實(shí)膨大和作物早熟,提高作物抗毒、抗病能力。此項(xiàng)應(yīng)用一般用清水稀釋20倍后,噴灑葉面、噴灌滴灌、澆根、浸根均可。
3.?污水、垃圾的凈化和除臭。在養(yǎng)殖中,由于密度大,大量的飼料投喂和動(dòng)物糞便的排泄,加上其他工業(yè)、居民生產(chǎn)生活也產(chǎn)生高濃度的廢水,給環(huán)境造成極大負(fù)擔(dān)。PSB處理污水效果好,連續(xù)投放三次,間隔一周,每次每畝投放20升,可以達(dá)到污水綜合排放標(biāo)準(zhǔn)。垃圾除臭采用噴灑處理。
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光合細(xì)菌
光合細(xì)菌適宜生長(zhǎng)在15℃—40℃的環(huán)境中,有半環(huán)狀、桿狀、球狀、螺旋狀等多種形態(tài)。光合細(xì)菌雖不含葉綠體,但含有類似葉綠體的結(jié)構(gòu),在此結(jié)構(gòu)中有葉綠素、菌綠素、輔助色素類胡蘿卜素和藻膽素等細(xì)菌光合色素,這些色素是光合細(xì)菌進(jìn)行光合作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。
光合細(xì)菌菌體無(wú)毒且營(yíng)養(yǎng)豐富,含有65.45%蛋白質(zhì),7.18%脂肪,2.78%粗纖維和20.31%可溶性糖。PSB菌體還含有豐富的B族微生物(其中維生素B12含量是酵母的200倍)和16種人體必需氨基酸、泛酸、葉酸等。除此之外,還含有抗病毒物質(zhì)、促生長(zhǎng)因子和輔酶Q等多種生理活性物質(zhì),尤其是輔酶Q含量分別為酵母、菠菜葉和玉米幼芽的13倍、94倍和82倍。光合細(xì)菌也因此被開發(fā)成多種保健食品。據(jù)美國(guó)商務(wù)部透露,僅1992年, 美國(guó)保健品中約有5.5% ~ 6.5%的品種加有不同比重的光合細(xì)菌菌液;日本生物化學(xué)工業(yè)公司生產(chǎn)的一種紫色光合細(xì)菌保健食品還申請(qǐng)了專利。
由于以煤焦油系為主要成分的合成色素具有致癌性,天然色素的開發(fā)引起了廣泛關(guān)注。光合細(xì)菌含有的類胡蘿卜素是一種用途非常廣泛的功能色素,在用作食品添加劑的同時(shí)還可起到抗氧化的保健作用。采用光合細(xì)菌發(fā)酵生產(chǎn)的類胡蘿卜素?zé)o毒、色彩鮮艷,目前已被廣泛應(yīng)用于油脂類、豆制品、冰淇淋、糕點(diǎn)以及飲料等的著色。
此外,光合細(xì)菌還可作為優(yōu)良的水質(zhì)改良劑和飼料添加劑應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖和畜禽飼養(yǎng)上。
The post 一種有益的微生物——光合細(xì)菌 first appeared on 上海光語(yǔ)生物科技有限公司.]]>上海光語(yǔ)生物科技有限公司提供的光合細(xì)菌培養(yǎng)設(shè)備和技術(shù),可以幫助企業(yè)獲得純正的光合菌,而不是市面買來(lái)的攙和了色素的偽劣產(chǎn)品。歡迎來(lái)電咨詢。
The post “光合菌”治理湖泊“營(yíng)養(yǎng)過(guò)?!?/a> first appeared on 上海光語(yǔ)生物科技有限公司.]]>經(jīng)典的紫色非硫細(xì)菌(紅螺菌)的富集培養(yǎng)基的配方為:NH4Cl:0.1g;?NaHCO3:0.1g;K2HPO4:0.02g;CH3COONa:0.1~0.5g;MgSO4·7H2O:0.02g;?NaCl:0.05~0.2g;?生長(zhǎng)因子1ml,蒸餾水97ml,微量元素溶液1ml,pH為7.0。
其中,①5%NaHCO3水溶液,過(guò)濾除菌取2m1加入無(wú)菌培養(yǎng)基中。②生長(zhǎng)因子:維生素B10.001mg、乙尼克丁酸0.1mg、對(duì)氨基苯甲酸0.1mg、生物素0.001mg,以上藥品溶于蒸餾水中,定容至10ml,然后過(guò)濾除菌。③微量元素溶液:FeCl3·6H2O?:5mg;CuS04·5H2O:0.05mg;H3BO4lmg;MnCl2·4H2O:0.05mg;ZnSO4·7H2O:1mg;Co(NO3)2·6H2O:?0.5mg。以上藥品分別溶于蒸餾水中,并定容至1000m1。
除①、②、③外,各成分溶解后100?Pa滅菌20min。然后分別加入①、②、③,如加入0.1%~0.3%的蛋白胨則能促進(jìn)該菌生長(zhǎng)。
2、分離培養(yǎng)基:
傳統(tǒng)的紅螺科分離培養(yǎng)基的配方為:NH4Cl:0.1g;?MgCl2:0.02g;?酵母膏:0.01g;?K2HPO4:0.05g;?NaCl:?0.2g;?瓊脂2g,蒸餾水90ml。100Pa滅菌20min。
滅菌后,無(wú)菌操作加入經(jīng)過(guò)濾除菌的0.5g/5mlNaHCO3,再無(wú)菌加入過(guò)濾除菌的0.1g或0.1mlNa2S·9H2O(降低培養(yǎng)基的氧化還原值),最后再加入5ml經(jīng)過(guò)濾除菌的乙醇、戊醇或4%丙氨酸。用過(guò)濾滅菌的0.1mol/H3PO3調(diào)pH至7.0。
3、篩選富集培養(yǎng)基
? ? ? ? ? ?NH4Cl?1g/L,?NaHCO3?1g/L,?CH3COONa?3g/L,?KH2PO4?0.3g/L,?MgSO4?0.1g/L,?酵母膏0.5g/L,?微量元素母液1g,?自然pH值。擴(kuò)大培養(yǎng)培養(yǎng)基以海水代替微量元素母液。1000~4000lx光照,?(30±2)℃恒溫培養(yǎng)。
參考文獻(xiàn):固定化海洋光合細(xì)菌處理生活污水的研究*???黃寶興,李蘭生,趙亮,張微,唐迎迎????海洋湖沼通報(bào)
4、基礎(chǔ)培養(yǎng)基
NH4Cl:1g;?Na2HPO4:?0.5g;?MgSO4:?0.2g;?NaCl:?2g;?NaHCO3:?5g;?酵母膏:2g?;?乙醇2ml,用?0.1N?H3PO4調(diào)至pH7.0。
劃線培養(yǎng)基:采用固體瓊脂培養(yǎng)基,即在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加1.0%的瓊脂。
以上培養(yǎng)基初始pH值均用H3PO4調(diào)至7.0,經(jīng)121℃滅菌30分鐘,NaHCO3過(guò)濾除
菌后加入。培養(yǎng)條件:光照培養(yǎng)箱溫度控制在30℃、光照強(qiáng)度控制在?3000uE.m-2s-1培養(yǎng)。
光合細(xì)菌是一種兼性嫌氣細(xì)菌,需要深層培養(yǎng)或在真空干燥器內(nèi)達(dá)到嫌氣或半嫌氣狀態(tài),一般將混合菌放入培養(yǎng)液中先富集再分離。具體方法:將混合菌裝入?10ml試管中,加入培養(yǎng)液充滿至刻度,蓋上膠塞,在光照條件下保持在30℃左右培養(yǎng)。待培養(yǎng)液出現(xiàn)紅色后,取培養(yǎng)液加1.5%的瓊脂,制成固體培養(yǎng)基,取菌液分別用無(wú)菌水以10-100000000倍稀釋,分別取lml樣本涂在平皿上,光照、30℃培養(yǎng)2d左右在平板上長(zhǎng)出菌落。移至平板采用劃線法進(jìn)行分離,將劃好線的平板倒置,在相同條件下培養(yǎng),反復(fù)分離純化,挑取不同特征的菌落,用斜面保存,純化分離后的菌種置于冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>
PSB?培養(yǎng)中除碳、氮、磷等主要營(yíng)養(yǎng)元素外,還需要一定量的鎂、鈣、鈉和有關(guān)的微量元素,將所需的營(yíng)養(yǎng)元素按一定的比例配成適于菌體生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)基。本實(shí)驗(yàn)室采用酵母膏、蛋白胨培養(yǎng)基,基本配方為:CaCl2?0.3g,MgSO4·7H2O?0.5g,酵母膏3g,蛋白胨3g,蒸餾水1000ml,pH:?6.8.?如需制固體培養(yǎng)基再加2%瓊脂。培養(yǎng)溫度:25℃~30℃最佳,光照強(qiáng)度:2000LX~5000LX,PH:7.5~8.5最佳。
把菌種接種到滅好菌的培養(yǎng)基中,在三角瓶中進(jìn)行二級(jí)培養(yǎng),每天搖晃幾次。把?40L?的反應(yīng)器中加滿自來(lái)水,放入通氣管,蓋上保鮮膜一起用次氯酸殺菌消毒24小時(shí),用硫代硫酸鈉(1L次氯酸需要150g硫代硫酸鈉)來(lái)中和。以15%的接種量接入反應(yīng)器中,用泵通氣培養(yǎng),用分光光度計(jì)跟蹤測(cè)量菌液的密度,得到菌液的密度較高,而且反應(yīng)器還可以進(jìn)一步放大。
5、細(xì)菌生長(zhǎng)培養(yǎng)基
NaCOOH3.0g.酵母膏3.0g,NH4CL2.0g,KH2PO4 0.5g,天然海水1000ml,高溫滅菌。
100ml具塞容量瓶中裝有50ml光合細(xì)菌培養(yǎng)基,按10%接種量接種母液(約每毫升10億個(gè)細(xì)胞)混合均勻后置于恒溫光照培養(yǎng)箱中光照厭氧培養(yǎng),光強(qiáng)2500Lux,溫度30攝氏度。
6、HCH光合細(xì)菌培養(yǎng)基
滅菌條件
(1)高壓蒸汽滅菌?小件玻璃器皿、培養(yǎng)基等采用濕式高壓蒸汽滅菌。這種滅菌方式可以達(dá)到徹底的滅菌。滅菌條件:0.103?MPa,120?℃,20min。
(2)紫外滅菌?無(wú)菌操作臺(tái)采用紫外滅菌方式,用紫外燈滅菌?30min。該種方式對(duì)空氣進(jìn)行滅菌。
光合細(xì)菌的純培養(yǎng)
本課題研究所用光合細(xì)菌為?Z08,除特殊說(shuō)明外,皆是由純培養(yǎng)獲得。將?50?mL?HCH?培養(yǎng)基灌裝于?250?mL?三角瓶,用封口膜將瓶口密封,以防止灰塵和雜菌進(jìn)入。灌裝好的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌?20?min。待冷卻以后,在無(wú)菌操作臺(tái)中接種?OD660=1.0(干重?840?mg/L)的?Z08?15?mL。接種后將菌液放置在?140?rpm?的恒溫?fù)u床中培養(yǎng),控制溫度?30?℃,24?h?照明,照度?500—1000?lx,培養(yǎng)?48?h?達(dá)到穩(wěn)定期。培養(yǎng)后的光合細(xì)菌保存在?4℃條件下備用。
紅色非硫光合細(xì)菌富集培養(yǎng)基的配制:?NaHCO3?1.0?g;?NH4Cl?1?g;?K2HPO4??0.2?g;CH3COONa?1.0~5.0?g;MgSO4·7H2O?0.2?g;?NaCl?0.5~2.0?g;酵母浸汁0.1?g;微量元素10?mL。
將上述成分溶于蒸餾水中,調(diào)節(jié)pH至7.0,定容1000?mL。在115℃下滅菌20?min。
光合細(xì)菌的分離與培養(yǎng)
①?液體富集培養(yǎng)基:CH3COONa?3.0?g?,CH3CH2COONa?0.3?g,NaCl?1.0?g,(NH4)2SO4?0.3?g,MgSO4·7H2O?0.5?g,K2HPO4?0.7?g,CaCl2?0.05?g,MnSO4?0.0025?g,FeSO4?0.005?g,酵母膏?0.1?g,谷氨酸?1.0?g,蒸餾水定容至?1?L,調(diào)?pH?至?7.4。
②?固體分離培養(yǎng)基:CH3COONa?3.0?g·L-1,酵母膏?3.0?g·L-1,CaCl2?0.3?g·L-1,MgSO4·7H2O?0.5g·L-1,瓊脂?20?g·L-1,調(diào)?pH7.4。
培養(yǎng)條件:取少量活性污泥樣品于裝有?120?mL?富集培養(yǎng)基的?125?mL?血清瓶中富集,置于光照培養(yǎng)箱中?30?℃培養(yǎng),照度為?2000?1x。6~9?d?后,液體培養(yǎng)基變?yōu)榧t色,經(jīng)搖床振蕩稀釋處理后,涂布和劃線于平板固體培養(yǎng)基上,置于恒溫培養(yǎng)箱中黑暗好氧培養(yǎng),7?d?后獲得單菌落。在平板固體培養(yǎng)基中重復(fù)劃線?3?次以上,直到在顯微鏡下觀察為純菌。
7、RCVBN擴(kuò)大培養(yǎng)基
優(yōu)化培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)采用RCVBN擴(kuò)大培養(yǎng)基,其組成為:CH3COONa?3.0g,?(NH4)2SO4?1.0g,?MgSO4?0.2g,?NaCl?1.0g,?KH2PO4?0.3g,?K2HPO4?0.5g,?CaCl2?0.05g,?酵母膏0.1g,?微量元素溶液1mL,?蒸餾水1000mL.
微量元素溶液為改良的Imhoff和Truper生長(zhǎng)因子溶液,其組成為:?EDTA-2Na?2g,?FeSO4·7H2O?0.2g,?MnCl2·4H2O?0.1g,?H3BO3?0.1g,?CoCl2·6H2O?0.1g,?ZnCl2?0.1g,?Na2MoO4·2H2O?0.02g,?NiCl2·6H2O?0.02mg,?CuCl2·2H2O?0.01g,?蒸餾水1000mL。
培養(yǎng)方法
在8個(gè)CSTR光合培養(yǎng)器中進(jìn)行分批培養(yǎng),培養(yǎng)器體積為50?L。培養(yǎng)器光照根據(jù)強(qiáng)度不同的需要分別由三只25W,40W,60W,100W白熾燈泡組合提供,培養(yǎng)器的底部設(shè)有穿孔曝氣管,根據(jù)DO含量間歇開啟,培養(yǎng)器內(nèi)設(shè)有溫控器。
8、光合細(xì)菌參考培養(yǎng)基
無(wú)水乙酸鈉5mg,氯化銨1.0mg,磷酸氫二鉀0.2mg,MgSO4·7H2O 0.2mg, 碳酸氫鈉1.0mg,酵母浸膏0.1mg,氯化鈉1.0mg調(diào)節(jié)pH為7.1-7.2, 1.05Mpa,121攝氏度滅菌20分鐘,固體培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加15-20%瓊脂
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光合細(xì)菌重點(diǎn)為厭氣性種類,也有少許屬于兼氣性品種,它們地都可以在「有光無(wú)氧」地環(huán)境下被培養(yǎng)。在這里面又分自營(yíng)性種類,及異營(yíng)性種類,所以不見得所有地光合細(xì)菌都適合應(yīng)用于水族缸作為凈水制劑。
已知在水族缸地好氣環(huán)境中,只有兼氣異營(yíng)性地光合細(xì)菌(如紅螺菌科菌種)最適合作為凈水制劑。它地培養(yǎng)物通常是少許有機(jī)營(yíng)養(yǎng)液,而且培養(yǎng)完成之后,可以直接填充瓶封為商品。此種商品一旦開封之后,可以立即聞到一股惡臭,如果再加上顯色辨識(shí),應(yīng)該很容易確認(rèn)。
反觀硝化細(xì)菌均為好氣自營(yíng)性種類,在它地菌液中,通常不能含有任何易分解地有機(jī)成分,否則不僅會(huì)立即遭致異營(yíng)性細(xì)菌地污染,連瓶封環(huán)境中地有限氧氣,很快就會(huì)被耗盡,使得硝化細(xì)菌因缺乏氧氣而無(wú)法長(zhǎng)時(shí)間生存在這里面。因此,凡是硝化細(xì)菌制劑,應(yīng)該是沒(méi)有明顯地臭味地。
光合硝化細(xì)菌制劑的迷失
光合硝化細(xì)菌菌制=【光合細(xì)菌+硝化細(xì)菌】地混合制劑?這種產(chǎn)品既然命名為「光合硝化細(xì)菌」,難道真有這種細(xì)菌存在?非也,這應(yīng)該只是商品名稱吧!可能指這種產(chǎn)品相應(yīng)情況下具有光合細(xì)菌及硝化細(xì)菌地雙重作用地效果。不過(guò)在網(wǎng)絡(luò)上有眾多人認(rèn)為,它真是一種光合細(xì)菌與硝化細(xì)菌地混合制劑。
光合細(xì)菌與硝化細(xì)菌在生態(tài)上是二種完全獨(dú)立,而且互不隸屬地細(xì)菌,它們不僅能源獲得不同,連營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)及呼吸代謝也有所差異,實(shí)在很難想象這二類細(xì)菌可以制成混合制劑,因此我們寧愿相信它只是商品名稱而已,而不必去過(guò)度濾揣測(cè),它是否為光合細(xì)菌與硝化細(xì)菌地混合制劑。
眾多光合細(xì)菌(重點(diǎn)是自營(yíng)性)對(duì)氮源地利用較廣,一般可利用銨鹽、氨氮,甚至氮?dú)?,少?shù)還能利用硝酸鹽和尿素。因此在功能上多少也具有類似硝化細(xì)菌地除氨作用,也許因?yàn)槿绱?,聰明地生產(chǎn)廠家才把單純地光合細(xì)菌制劑以「光合硝化細(xì)菌」命名之,藉以增加銷路。不過(guò)相較于硝化細(xì)菌,這種產(chǎn)品地除氨效果不會(huì)較強(qiáng),應(yīng)該可以被理解地,蓋氨為硝化細(xì)菌地維生地能源(耗量多),而非像光合細(xì)菌只是營(yíng)養(yǎng)成分而已(耗量少)。
結(jié)論
優(yōu)良地水質(zhì)是成功養(yǎng)殖地先決條件,而健全地微生物凈水系統(tǒng)又是確保優(yōu)良地水質(zhì)地基礎(chǔ),所以對(duì)于如何建立有益微生物凈水系統(tǒng),已經(jīng)成為我們必須去努力追求地目標(biāo)。在這個(gè)創(chuàng)建地過(guò)程中,凡能選用優(yōu)良地微生物制劑,以協(xié)助既有地微生物凈水系統(tǒng)能發(fā)揮更強(qiáng)大地功能,將水中有害物質(zhì)徹除。